RP-HPLC法同时测定复方氟康唑霜中氟康唑、甲硝唑、氯霉素3种组分含量
作者：夏晓萍 周月红
单位：夏晓萍(浙江医科大学妇产科医院 310006)；周月红(浙江嘉兴第一医院 314000)
关键词：反相高效液相色谱法；氟康唑；甲硝唑；氯霉素
药物分析杂志000112 摘 要：目的：建立同时测定复方氟康唑霜中氟康唑、甲硝唑、氯霉素3组分含量的简便方法。方法：反相高效液相色谱法，采用外标法，Ultrasphere-ODS柱，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测波长261 nm。结果：线性范围分别是：氟康唑 40.1～200.6 μg.mL-1，r=0.999 4；甲硝唑 20.0～100.0 μg.mL-1，r=0.999 8；氯霉素 39.9～199.6 μg.mL-1，r=0.999 8。平均回收率：氟康唑98.31%；甲硝唑100.4%，氯霉素98.17%。结论：本法分离度好，快速，简便。适用于该制剂中3种成分的同时测定。
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Determination of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol
in Compound Fluconazole Cream by RP-HPLC
Xia Xiaoping
(The Affiliated Hospital for Gynecology and Obstetrics, Zhejiang Medical University, Hangzhou 310006)
Zhou Yuehong
(Zhejiang Jiaxing No.1 Hospital, Jiaxing 314000)
Abstract：Objective：To establish a method for determination of the three constituents in compound Fluconazole cream: Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol.Method:RP-HPLC was applied to quantitative analysis. Ultrasphere-ODS column was used. The mobile phase was composed of methanol-water(50∶50). The UV detection wave length was 261 nm. Results:The linear response range from 40.1～200.6 μg.mL-1 of Fluconazole(r=0.999 4).20.0～100.0 μg.mL-1 of Metronidazole(r=0.999 8).39.9～199.6 μg.mL-1 of Chloramphenicol(r=0.999 8). The mean recoveries of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol were 98.31%, 100.4%, 98.17%. Conclusion:The method is simple, sensitive and suitable for the determination of the three constituents in compound cream.
, 百拇医药
Key words：RP-HPLC, fluconazole, metronidazole, chloramphenicol▲
复方氟康唑霜由氟康唑、甲硝唑、氯霉素、乳膏基质等组成，为医院新制剂。对念珠菌性、细菌性混合阴道感染有较好疗效[1]。关于氟康唑、甲硝唑等单方的含量测定，已有文献报道[2，3]。本实验采用反相高效液相色谱法，同时测定此复方制剂中氟康唑、甲硝唑、氯霉素的含量，方法准确、简便，为制剂质量的控制，提供了科学依据。
1 仪器与试药
338型高效液相色谱仪(美国Beckman)，125双泵，166紫外检测器，406控制器。
氟康唑对照品(香港志达公司，含量100.9%)。
甲硝唑对照品(武汉制药股份有限公司，含量99.0%)。
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氯霉素对照品(中国进出口上海公司，含量98.7%)。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Ultrasphere-ODS柱(4.6 mm×25 cm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；流速0.8 mL.min-1；柱温为室温；检测波长261 nm；检测灵敏度0.05 AUFS；进样量20 μL。
2.2 系统适用性实验 在该色谱条件下对照品及样品的色谱图见图1。可见样品中各被测组分间良好分离。色谱系统适用性实验结果见表1。
图1 对照品(A)及样品(B)色谱图
1.甲硝唑 2.氟康唑 3.氯霉素
, 百拇医药
表1 系统适用性实验结果 名称
保留时间/min
理论塔板数
分离度
甲硝唑
4.38
2657
氟康唑
6.08
2275
6.80
氯霉素
7.80
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2751
4.59
2.3 干扰性实验 按处方量取空白基质适量，参照样品分析方法处理，结果基质不干扰样品中3种组分的测定。
2.4 线性关系 精密称取干燥至恒重的对照品氟康唑0.1 g，氯霉素0.1 g，甲硝唑0.05 g。置250 mL量瓶中，以流动相定容，为储备液。精密吸取储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。各进样20 μL。以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归。结果见表2。表明3种成分峰面积与浓度呈良好的线性关系。表2 3种成分的线性关系 成分
线性方程
r
线性范围/μg.mL-1
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甲硝唑
C=3.4097A-1.1795
0.9998
20.0～100.0
氟康唑
C=29.9244A+2.6866
0.9994
40.1～200.6
氯霉素
C=2.6554A-0.9087
0.9998
39.9～199.6
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2.5 回收率实验 根据处方比例精确配制样品霜剂。精密称取样品适量，在线性范围内，配制高、中、低3挡浓度。按样品测定项下操作。得平均回收率，结果(n=6)甲硝唑为100.4%，RSD为1.67%；氟康唑为98.31%，RSD为1.35%；氯霉素为98.17%，RSD为1.50%。
2.6 重现性实验 取回收率项下的1份溶液分别在日内(每隔1 h进样，进样6次)、日间(1，2，3 d)进样。记录峰面积。结果见表3。表明方法的重现性较好。表3 日内及日间精密度(%) 成分
日内RSD(n=6)
日间RSD(n=3)
甲硝唑
0.34
1.23
, 百拇医药
氟康唑
1.02
1.66
氯霉素
1.06
2.00
2.7 样品含量测定 取3个批号样品，精密称取适量(约0.5 g)，置100 mL量瓶中，加50%甲醇约60 mL，在50～60 ℃水浴中振摇使溶解。再置冰水浴中冷却2 h，放至室温，加50%甲醇至刻度。摇匀，过滤，弃初滤液，取续滤液，进样20 μL。记录峰面积，外标法计算3种成分含量，测定结果见表4。表4 样品含量测定结果(百分标示量，n=3) 样品
甲硝唑
氟康唑
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氯霉素
1
97.3
102.4
99.4
2
103.1
98.1
98.0
3
98.4
96.3
98.7
, 百拇医药
2.8 稳定性实验 在本实验条件下，样品溶液室温放至24 h，测得3种组分含量基本不变。3 讨论
3.1 检测波长的确定 从紫外扫描光谱图可见，氟康唑在261 nm处有最大吸收峰，氯霉素、甲硝唑在此波长处也有较大的吸收。故选择261 nm为含量测定的检测波长。
3.2 外标法的确定 由于色谱图中已有3个主成分峰及溶剂、辅料峰，故宜于使用外标法。
3.3 流动相的确定 本实验中曾选择不同比例的甲醇、水，结果表明在甲醇-水(50∶50)较为适宜，分离度好，峰型好，且1次进样，10 min即完成色谱分析。适宜于制剂的快速检验。
3.3 提取方法的确定 由于样品霜中有一部分为油溶性基质，须在50～60 ℃水浴中加热使其熔化，使主药溶解于溶剂中。由于基质也有部分溶解于溶剂中，故须在冰水浴中充分放置，使基质析出，过滤。■
参考文献：
[1]傅洁民.抗真菌新药—氟康唑.国外医药合成药生化药制剂分册，1992，13(3)：155
[2]周家骅，诸昌煦.高效液相色谱法测定氟康唑注射液的含量.现代应用药学，1994，11(5)：35
[3]徐维平，胡葆诚，程鹏等.高效液相色谱法同时测定氟康唑滴眼液中二组分的含量.药物分析杂志，1997，17(5)：313
收稿日期：1998-11-19, http://www.100md.com
单位：夏晓萍(浙江医科大学妇产科医院 310006)；周月红(浙江嘉兴第一医院 314000)
关键词：反相高效液相色谱法；氟康唑；甲硝唑；氯霉素
药物分析杂志000112 摘 要：目的：建立同时测定复方氟康唑霜中氟康唑、甲硝唑、氯霉素3组分含量的简便方法。方法：反相高效液相色谱法，采用外标法，Ultrasphere-ODS柱，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测波长261 nm。结果：线性范围分别是：氟康唑 40.1～200.6 μg.mL-1，r=0.999 4；甲硝唑 20.0～100.0 μg.mL-1，r=0.999 8；氯霉素 39.9～199.6 μg.mL-1，r=0.999 8。平均回收率：氟康唑98.31%；甲硝唑100.4%，氯霉素98.17%。结论：本法分离度好，快速，简便。适用于该制剂中3种成分的同时测定。
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Determination of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol
in Compound Fluconazole Cream by RP-HPLC
Xia Xiaoping
(The Affiliated Hospital for Gynecology and Obstetrics, Zhejiang Medical University, Hangzhou 310006)
Zhou Yuehong
(Zhejiang Jiaxing No.1 Hospital, Jiaxing 314000)
Abstract：Objective：To establish a method for determination of the three constituents in compound Fluconazole cream: Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol.Method:RP-HPLC was applied to quantitative analysis. Ultrasphere-ODS column was used. The mobile phase was composed of methanol-water(50∶50). The UV detection wave length was 261 nm. Results:The linear response range from 40.1～200.6 μg.mL-1 of Fluconazole(r=0.999 4).20.0～100.0 μg.mL-1 of Metronidazole(r=0.999 8).39.9～199.6 μg.mL-1 of Chloramphenicol(r=0.999 8). The mean recoveries of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol were 98.31%, 100.4%, 98.17%. Conclusion:The method is simple, sensitive and suitable for the determination of the three constituents in compound cream.
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Key words：RP-HPLC, fluconazole, metronidazole, chloramphenicol▲
复方氟康唑霜由氟康唑、甲硝唑、氯霉素、乳膏基质等组成，为医院新制剂。对念珠菌性、细菌性混合阴道感染有较好疗效[1]。关于氟康唑、甲硝唑等单方的含量测定，已有文献报道[2，3]。本实验采用反相高效液相色谱法，同时测定此复方制剂中氟康唑、甲硝唑、氯霉素的含量，方法准确、简便，为制剂质量的控制，提供了科学依据。
1 仪器与试药
338型高效液相色谱仪(美国Beckman)，125双泵，166紫外检测器，406控制器。
氟康唑对照品(香港志达公司，含量100.9%)。
甲硝唑对照品(武汉制药股份有限公司，含量99.0%)。
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氯霉素对照品(中国进出口上海公司，含量98.7%)。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Ultrasphere-ODS柱(4.6 mm×25 cm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；流速0.8 mL.min-1；柱温为室温；检测波长261 nm；检测灵敏度0.05 AUFS；进样量20 μL。
2.2 系统适用性实验 在该色谱条件下对照品及样品的色谱图见图1。可见样品中各被测组分间良好分离。色谱系统适用性实验结果见表1。
图1 对照品(A)及样品(B)色谱图
1.甲硝唑 2.氟康唑 3.氯霉素
, 百拇医药
表1 系统适用性实验结果 名称
保留时间/min
理论塔板数
分离度
甲硝唑
4.38
2657
氟康唑
6.08
2275
6.80
氯霉素
7.80
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2751
4.59
2.3 干扰性实验 按处方量取空白基质适量，参照样品分析方法处理，结果基质不干扰样品中3种组分的测定。
2.4 线性关系 精密称取干燥至恒重的对照品氟康唑0.1 g，氯霉素0.1 g，甲硝唑0.05 g。置250 mL量瓶中，以流动相定容，为储备液。精密吸取储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。各进样20 μL。以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归。结果见表2。表明3种成分峰面积与浓度呈良好的线性关系。表2 3种成分的线性关系 成分
线性方程
r
线性范围/μg.mL-1
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甲硝唑
C=3.4097A-1.1795
0.9998
20.0～100.0
氟康唑
C=29.9244A+2.6866
0.9994
40.1～200.6
氯霉素
C=2.6554A-0.9087
0.9998
39.9～199.6
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2.5 回收率实验 根据处方比例精确配制样品霜剂。精密称取样品适量，在线性范围内，配制高、中、低3挡浓度。按样品测定项下操作。得平均回收率，结果(n=6)甲硝唑为100.4%，RSD为1.67%；氟康唑为98.31%，RSD为1.35%；氯霉素为98.17%，RSD为1.50%。
2.6 重现性实验 取回收率项下的1份溶液分别在日内(每隔1 h进样，进样6次)、日间(1，2，3 d)进样。记录峰面积。结果见表3。表明方法的重现性较好。表3 日内及日间精密度(%) 成分
日内RSD(n=6)
日间RSD(n=3)
甲硝唑
0.34
1.23
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氟康唑
1.02
1.66
氯霉素
1.06
2.00
2.7 样品含量测定 取3个批号样品，精密称取适量(约0.5 g)，置100 mL量瓶中，加50%甲醇约60 mL，在50～60 ℃水浴中振摇使溶解。再置冰水浴中冷却2 h，放至室温，加50%甲醇至刻度。摇匀，过滤，弃初滤液，取续滤液，进样20 μL。记录峰面积，外标法计算3种成分含量，测定结果见表4。表4 样品含量测定结果(百分标示量，n=3) 样品
甲硝唑
氟康唑
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氯霉素
1
97.3
102.4
99.4
2
103.1
98.1
98.0
3
98.4
96.3
98.7
, 百拇医药
2.8 稳定性实验 在本实验条件下，样品溶液室温放至24 h，测得3种组分含量基本不变。3 讨论
3.1 检测波长的确定 从紫外扫描光谱图可见，氟康唑在261 nm处有最大吸收峰，氯霉素、甲硝唑在此波长处也有较大的吸收。故选择261 nm为含量测定的检测波长。
3.2 外标法的确定 由于色谱图中已有3个主成分峰及溶剂、辅料峰，故宜于使用外标法。
3.3 流动相的确定 本实验中曾选择不同比例的甲醇、水，结果表明在甲醇-水(50∶50)较为适宜，分离度好，峰型好，且1次进样，10 min即完成色谱分析。适宜于制剂的快速检验。
3.3 提取方法的确定 由于样品霜中有一部分为油溶性基质，须在50～60 ℃水浴中加热使其熔化，使主药溶解于溶剂中。由于基质也有部分溶解于溶剂中，故须在冰水浴中充分放置，使基质析出，过滤。■
参考文献：
[1]傅洁民.抗真菌新药—氟康唑.国外医药合成药生化药制剂分册，1992，13(3)：155
[2]周家骅，诸昌煦.高效液相色谱法测定氟康唑注射液的含量.现代应用药学，1994，11(5)：35
[3]徐维平，胡葆诚，程鹏等.高效液相色谱法同时测定氟康唑滴眼液中二组分的含量.药物分析杂志，1997，17(5)：313
收稿日期：1998-11-19, http://www.100md.com